紫菜体细胞的培养方法
2012-04-20 11:13:18 艾格农业数据库(Cnagri Database) 点击： 请关注艾格农业微信公众号,获取更多精彩文章
紫菜体细胞培养不同于传统方法，它必须在温度适宜下，在一定营养成分的培养液中，经过良好的光照条件才能正常分化发育。
（1）体细胞培养方式：常用的有平面培养与悬浮培养两种方式：平面培养是将体细胞按一定量投放于培养箱或培养池中进行培养；悬浮培养是用培养瓶或一定尝试的池子，将一定量的细胞投入，用搅拌器不断促进水流动，细胞始络悬浮于水中也可以用通气管加以通气，造成水的流动，两种方式培养，均需要密切注意培养条件和加强管理。
（2）体细胞培养条件：培养的条件有培养液的配制，海水比重的调整、光照、培养的温度、通气、营养盐、换水等。
①培养液配制：培养两种紫菜的体细胞均是用MES培养液，这是修订的ES培养液，先配成浓的母液，然后在培养的海水中加入一定量的母液而成。待培养1周后可不加此母液，仅加N9氮肥）和P（磷肥）亦可。
②海水比重：培养开始，先用比重为1.030的海水培养8小时以后，可加入1.020左右海水稀释到1.027，再过8小时，再稀释到1.025，最后可稀释到1.023。以后一直用一般海水培养。这样逐渐降低比重的目的，是为了避免刚酶解的体细胞因骤然降低比重而引起剧烈渗透压改变，而使细胞死亡的现象。
③光照条件：刚酶解出的细胞投入培养，开始可以不见光，一天后可见弱光500勒克斯，3天内逐渐加强到1000勒克斯左右。到一周左右可加强到2000-3000勒克斯光时以12：12小时为宜，如利用自然光时，需避免直射或初期培养的强光。
④培养温度：两种紫菜体细胞的培养温度以20±2℃为最适宜，因此培养体细胞唯一需要特殊的条件和海带育苗室一样，要有恒温设备。尤其是在9月初水温受气温影响，一天中变化大，无恒温控制容易引起培养失败。如果9月下旬到10月上旬，在江苏沿海培养条斑紫菜体细胞时，因自然气温下降到23℃左右，这时也可进行常温培养，不需恒温设备。
⑤营养盐：除了用MES培养液外，在培养数天后，还需补加氮（N）肥4ppm，磷（P）肥1ppm。
⑥通气：在固定式或悬浮培养过程中，勇气是非常重要的，尤其后者水体深，通气尤为重要，否则细胞极易死亡。但通气大小亦应适度，气泡太大易伤害细胞； 气泡太小细胞又易沉淀。因此在体细胞培养中的通气标准，也是一项应该研究的内容，目前尚无定论，仅凭经验办事。
⑦换水：在培养过程中换水是很重要的，从培养第四天起，每天应换水一部分。首先先使细胞沉淀，抽取上面旧水，然后加入等量海水，如果海水不充足，亦可隔天换水，但不可一次换的太多，新加的海水，必须经过消毒。
⑧管理：体细胞培养，时间虽不长，但也需要加强管理，健全管理规则，切不可粗枝大叶，管理内容除上述①至⑦项外，每天应在上午抽取样品进行镜检，计算细胞成活率和生长发育情况。如发现异常现象，应采取措施以加以抢救或改善。
（1）体细胞培养方式：常用的有平面培养与悬浮培养两种方式：平面培养是将体细胞按一定量投放于培养箱或培养池中进行培养；悬浮培养是用培养瓶或一定尝试的池子，将一定量的细胞投入，用搅拌器不断促进水流动，细胞始络悬浮于水中也可以用通气管加以通气，造成水的流动，两种方式培养，均需要密切注意培养条件和加强管理。
（2）体细胞培养条件：培养的条件有培养液的配制，海水比重的调整、光照、培养的温度、通气、营养盐、换水等。
①培养液配制：培养两种紫菜的体细胞均是用MES培养液，这是修订的ES培养液，先配成浓的母液，然后在培养的海水中加入一定量的母液而成。待培养1周后可不加此母液，仅加N9氮肥）和P（磷肥）亦可。
②海水比重：培养开始，先用比重为1.030的海水培养8小时以后，可加入1.020左右海水稀释到1.027，再过8小时，再稀释到1.025，最后可稀释到1.023。以后一直用一般海水培养。这样逐渐降低比重的目的，是为了避免刚酶解的体细胞因骤然降低比重而引起剧烈渗透压改变，而使细胞死亡的现象。
③光照条件：刚酶解出的细胞投入培养，开始可以不见光，一天后可见弱光500勒克斯，3天内逐渐加强到1000勒克斯左右。到一周左右可加强到2000-3000勒克斯光时以12：12小时为宜，如利用自然光时，需避免直射或初期培养的强光。
④培养温度：两种紫菜体细胞的培养温度以20±2℃为最适宜，因此培养体细胞唯一需要特殊的条件和海带育苗室一样，要有恒温设备。尤其是在9月初水温受气温影响，一天中变化大，无恒温控制容易引起培养失败。如果9月下旬到10月上旬，在江苏沿海培养条斑紫菜体细胞时，因自然气温下降到23℃左右，这时也可进行常温培养，不需恒温设备。
⑤营养盐：除了用MES培养液外，在培养数天后，还需补加氮（N）肥4ppm，磷（P）肥1ppm。
⑥通气：在固定式或悬浮培养过程中，勇气是非常重要的，尤其后者水体深，通气尤为重要，否则细胞极易死亡。但通气大小亦应适度，气泡太大易伤害细胞； 气泡太小细胞又易沉淀。因此在体细胞培养中的通气标准，也是一项应该研究的内容，目前尚无定论，仅凭经验办事。
⑦换水：在培养过程中换水是很重要的，从培养第四天起，每天应换水一部分。首先先使细胞沉淀，抽取上面旧水，然后加入等量海水，如果海水不充足，亦可隔天换水，但不可一次换的太多，新加的海水，必须经过消毒。
⑧管理：体细胞培养，时间虽不长，但也需要加强管理，健全管理规则，切不可粗枝大叶，管理内容除上述①至⑦项外，每天应在上午抽取样品进行镜检，计算细胞成活率和生长发育情况。如发现异常现象，应采取措施以加以抢救或改善。